細胞養(yǎng)不好?這些注意事項請收好
1、購買的細胞死亡或存活率不佳可能原因?細胞冷凍管解凍后,為何會有細胞數(shù)目太少的情形?
研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過程錯誤;冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心;懸浮細胞誤認為死細胞;培養(yǎng)溫度使用錯誤;細胞置于–80℃太久。
研究人員在冷凍細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。
2、收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落的原因?
冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,是因熱脹冷縮的物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。
3、如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之,優(yōu)選MEM做粘附細胞培養(yǎng),RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始,各種目的無血清培養(yǎng)*好優(yōu)選AIMV(12005)培養(yǎng)基(SFM)。
4、L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?
L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有*終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。